荧光物质(荧光团)能吸收特定波长的辐射(吸收:Abs),并发射更高波长的光(发射:Em),这种光称为荧光。荧光团的最大吸收波长和发射波长(λ
Abs
和 λ
Em
)通常以纳米 (nm) 为单位。
荧光团的重要特征:
斯托克斯位移
是最大吸收波长和最大发射波长之间的差值。
荧光寿命
是荧光化合物在通过发射光子返回基态之前处于激发态的持续时间。
量子产率 (
φ
)
是发射的光子数目与吸收的光子数目的比率,指示荧光过程的效率。
消光系数 (
ε)
决定了荧光团吸收特定波长光强度的度量。
荧光团的总亮度等于
(
ε)
乘以
(
φ
)。
影响荧光发射或检测的因素:
由分子重排、能量转移、碰撞淬灭和激发态反应引起的荧光
淬灭
会降低荧光分子的荧光强度。
光漂白
是指荧光团由于光照引起的损伤而永久丧失发出荧光的能力。
背景荧光
会降低信噪比和检测灵敏度。造成背景荧光的原因包括样本自发荧光和未被定位到特定靶标(或非特异性结合)的过量荧光团。
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