什么是胚胎冷冻及复苏移植？

胚胎冷冻是指在一个试管婴儿周期中，将部分或全部胚胎在冷冻保护剂的处理后，保存于-196℃的液氮中的过程；冷冻胚胎复苏移植则是指患者在后续的自然或人工月经周期时，将冷冻胚胎进行解冻，并将其植入子宫腔内，以获得妊娠的过程。

为什么要进行胚胎冷冻？

为了降低多胎妊娠，我国明确规定35岁以下妇女只能移植2个胚胎，35岁以上妇女可移植且最多只能移植3个胚胎，因此，剩余的可利用胚胎需要冷冻保存。目前胚胎冷冻-复苏移植已成为辅助生殖技术的重要组成部分，常规运用于辅助生殖治疗过程中，大大提高了胚胎的利用率以及患者单个取卵周期的累积妊娠率，减少了患者的社会经济和心理负担。

胚胎的冷冻方法有哪些？

胚胎的冷冻方法有程序冷冻法和玻璃化冷冻法两种方法。

程序冷冻法 ，需要特殊的冷冻降温仪器对胚胎进行逐步降温。该方法的优点是冷冻保护剂浓度低，对胚胎损伤小，适合于卵裂期胚胎，解冻复苏率和存活率达到70～80%以上。缺点是需要复杂的降温设备，冷冻时间比较长。

玻璃化冷冻 ，是在高浓度的冷冻保护剂作用下，细胞内物质在超低温环境下由液态直接冻结为玻璃化状态，起到保护作用。由于良好复苏率和妊娠率，临床上逐渐取代了程序冷冻法，广泛用于卵母细胞、卵裂期胚胎和囊胚的冷冻。该方法的优点是，操作简单不需要昂贵的冷冻设备，冷冻效果好，解冻复苏率和存活率达到90%以上。缺点是使用高浓度的冷冻保护剂，有可能对胚胎细胞存在毒性，需要进一步关注其对子代健康安全性评估。

目前我院全部应用玻璃化冷冻法冷冻胚胎，冷冻胚胎的复苏率98%，35岁及以下患者复苏周期中卵裂期胚胎妊娠率达到60%，囊胚妊娠率超过65%。

冷冻复苏过程会不会影响胚胎的质量？

目前临床上广泛使用的是玻璃化冷冻法，冷冻保护剂及冷冻载杆都经过反复优化，从十余年的临床应用看，冷冻胚胎的复苏率、存活率及妊娠率都达到较高的水平，取得了良好的效果，对胚胎质量的影响较小。对出生新生儿的安全性的问题，尚无足够的证据说明冷冻复苏周期与新鲜周期方面存在差异。

值得注意的是：

胚胎的冷冻复苏涉及到冷冻保护剂的使用，以及胚胎经历急剧的降温与升温过程，某些质量较差的胚胎不能很好的耐受这些过程，就会产生冷冻损伤。对于冷冻胚胎移植出生的婴儿的长期安全性问题，仍需更多的临床和基础研究进行深入的探讨。

冷冻胚胎能保存多久？

冷冻胚胎保存在-196℃的液氮中，细胞处于休眠状态，理论上只要冷冻环境保持不变，可以保存较长时间。对胚胎而言，冷冻保存的期限目前国内国际尚无明确的规定。各个国家冷冻胚胎保存期限一般在5-10年。国内最近两年陆续报道了冷冻16年和18年的胚胎复苏后成功妊娠并出生的案例。

全胚冷冻适合哪些人群？

有些人群不适合新鲜胚胎移植，需要行全胚冷冻，这些人群包括：

（1）卵巢过度刺激高风险（如多囊卵巢综合症）患者，全胚冷冻能够降低卵巢过度刺激（OHSS）的发生风险；

（2）HCG注射日孕酮水平升高。这类患者因子宫内膜着床窗可能提前关闭，不适合新鲜胚胎的移植。

（3）采用黄体期促排卵方法的患者，由于子宫内膜的发育时期与胚胎不一致不适合新鲜胚胎的移植，需要全胚冷冻。

（4）输卵管积水或宫腔积液显著影响胚胎着床的患者，可考虑全胚冷冻，待输卵管积水或宫腔积液等问题处理后进行复苏移植，以改善妊娠结局。

（5）卵巢低反应的患者，可以通过多次累积冷冻胚胎后进行移植，以提高妊娠率。

（6）行胚胎移植前遗传学诊断（PGD）或筛查（PGS）的患者。PGD或PGS检测需要一定的时间，胚胎冷冻技术为检测提供了便利条件。

胚胎冷冻的额外的好处有哪些？

由于超排卵技术的应用，患者在新鲜周期中雌激素的水平大大高于正常状态，而过高的雌激素水平可能对子宫内膜产生显著的不良影响。冷冻胚胎复苏移植能够避免子宫内膜受本周期卵巢刺激的影响，为胚胎着床提供更接近自然状态的子宫内环境。其次，对于子宫内膜薄的患者，冷冻胚胎复苏移植也便于医生充分准备子宫内膜，提高种植率。此外，对于有卵巢过度刺激综合症高危倾向的妇女，胚胎全部冷冻不进行卵巢新鲜周期的移植，将大大降低罹患卵巢过度刺激综合症的风险。

新鲜周期移植和冷冻周期移植，哪家强？

究竟是否应该进行新鲜周期的移植，一直存在争议。鉴于冷冻胚胎移植的诸多优点，国际国内渐有冷冻周期取代新鲜周期的趋势。最近陈子江教授及其团队完成的两项大型多中心随机对照试验，从很大程度上解决了冷冻与新鲜胚胎移植间的众多争议。研究结果显示在排卵功能正常的不孕患者中，冷冻胚胎移植无法改善妊娠和新生儿结局，但能够降低OHSS的发病风险。在多囊卵巢综合症（PCOS）患者中，冷冻胚胎移植组的总体活产率和单胎活产率要高于新鲜胚胎移植组，且冷冻胚胎移植后妊娠丢失和OHSS发生风险较低。因此，对于PCOS患者，宜全胚冷冻进行冷冻复苏周期移植；而其他患者，排除了OHSS的风险以后，是可以进行新鲜周期的移植的，以降低费用，减少不必要的等待时间及心理负担。

何种冷冻策略可以保证患者胚胎得到最大程度的利用？

一般而言，在取卵后第三天，医生将选择两个质量最好的卵裂期胚胎进行新鲜周期移植。之后根据剩余的有利用价值胚胎的数目，决定将其直接冷冻保存还是培养形成囊胚后再冷冻。

保证患者胚胎得到最大程度的利用，我院采取的冷冻策略是 ：如果患者第三天可利用的胚胎数目少，那么在移植以后直接将剩余的可利用胚胎冷冻起来，留待以后复苏移植。而如果患者有较多（≥8）的可利用胚胎，在移植后将选择最优的2-4个胚胎进行冷冻，剩余的胚胎进行囊胚培养，形成囊胚以后再进行冷冻保存。囊胚培养可以筛选有发育潜力的胚胎，提高胚胎的利用率，同时缓解胚胎实验室冻存的压力和空间。