逆转录酶
是能够聚合与原始 RNA 模板互补的 DNA 链 (cDNA) 的酶。RNA 易被 RNase 降解,使用逆转录酶生产 cDNA 能够克服使用 mRNA 时面临的问题。cDNA 成为 RNA 研究(例如基因表达分析)的各种下游应用中的稳定模板。可以使用常规 PCR、qPCR、一步式 RT-qPCR 或等温方法进行 cDNA 模板的扩增。扩增后,可以使用常规酶方案进行克隆,或利用 T4 DNA 聚合酶的 3’→5’ 核酸外切酶活性进行不依赖于连接反应的克隆。
所有逆转录酶(RNA 依赖性 DNA 聚合酶)均可用于:
RNA 聚合酶
,或更具体地说是 DNA 导向的 RNA 聚合酶,是利用 DNA 模板合成 RNA 的酶。Poly(A) 聚合酶使用单链 RNA 作为引物,通过催化腺嘌呤残基掺入 RNA 的 3’ 末端,将 poly(A) 尾部添加到 RNA 中。
T4 RNA 连接酶
在 RNA 分析中特别有用,尤其是高通量 RNA 测序和微阵列分析等上游程序。T4 RNA 连接酶 1 和 2 能够通过连接相邻的 3'-OH 和 5'-PO4 多核苷酸来标记、环化或执行 RNA 分子间连接。使用 T4 RNA 连接酶 1 将接头连接至 RNA 3’ 端是通过 RT-PCR 和高通量测序进行 RNA 定量和发现的第一步。
用于水解与 DNA 杂交的 RNA 的磷酸二酯键的
核糖核酸内切酶
RNase H 活性可降解 DNA:RNA 复合体的 RNA
模板,从而释放单链 cDNA 作为合成第二链
cDNA 的模板
Y9240L
RNase Inhibitor
RNase A、B、C 的猪源性非竞争性抑制剂;
不抑制 RNase H 活性。
保护 RNA 不被降解;通常用作 RNA 酶法
操纵的预防措施